Bolesti 

Laboratorijska dijagnostika mikoza. Uloga gljivične infekcije u ljudskoj patologiji

2. Laboratorijska proučavanje patološkog materijala

2.1. Mikroskopska istraživanja

Za otkrivanje morfoloških elemenata gljiva - kvasca, pseudomycelium, micelij, sjedišta za koliziju, konisiju, tkivo dubokih mikoza - patološki materijal ispituje se u matičnim i slikanim lijekovima.

Tečni patološki materijal gleda se u neusklađenom stanju u sljedećim prosvetnim tekućinama: mešavina alkohola sa glicerinom (etil alkohol 1 h., Glicerin 2 h, destilirana voda 2 h.), LUGOL Rješenje (1 g kristalnog joda), 2 g Kalijum jodid, 150 ml vode), kao i u vodi ili fiziološko rješenje. Za pripremu izvornih lijekova na predmetnoj staklo, petlja ili pipette nanosi se padom materijala, zatim 1-2 kapi prosvjetljenog tečnosti prekrivene su prekrivenim staklom i mikroskopijom s malim porastom od 1:80 (okular) 10x i objektiv 8x), na kojem možete vidjeti klastere ćelija kvasca, pseudommite, micelija i drugih elemenata gljiva. Uz veliko povećanje 1: 400, mogu se okarakterizirati pojedine ćelije.

Gusti patološki materijal (kože, pahuljice za nokte) postavljaju se u kap 10-20% COND pudera, blago zagrijane iznad plamena plamenika (za bolju maceraciju) dok se na periferiji padaju kristala. Tada je pad prekriven staklom premaza, blago pritisnuto na IT i mikroskopiju, prvo pod malim povećanjem za pronalaženje vaga, zatim s velikim uvećanjem.

U materijalu od kose plašta iz okolnog spora (Ectotrix) ili unutar kose (endotrix), gljivični elementi obično su vrlo jasno vidljivi. Lezije za kosu, poput veličine spora, specifične su za različite vrste Dermatofiti. Potrebna je diferencijalna dijagnoza između struktura gljiva i artefakata. Mogući izvori lažnih pozitivnih rezultata su kapi lipida, mjehurići za zrak, tekstilna vlakna i takozvana "mozaička gljiva". Kapi lipina mogu biti slične ćelijama kvasca - takve su pronalaže najčešće u slabo prosvjetljenom materijalu. Tekstilna vlakna obično leže odvojeno od epiderme, kose ili materijala za nokte. Oni su veći od gifa gljivice, neravnomjerne debljine i ne sadrže septembar. "Mozaik gljivica" je artefakt dobiven u procesu kristalizacije Kova sa pretjeranim grijanjem droge. Za razliku od gljiva, jasna razdvajanja na ćelijama se ne određuju.

Važan korak u dijagnostici gljivičnih infekcija je priprema obojenih lijekova. Bilo koji patološki materijal (razmazivanje droga, organizma, centrifuge i, naravno, histološkim odjeljcima) moraju proći tri glavne vrste obrade: 1) Pas-metoda bojanje za identifikaciju istinskih gljiva - EUmilete; 2) bojanje prema metodi grama ili u modifikacijama gram-raygera, prema Bogolepovu, na Brown-Brenna - da identifikuju istovremene bakterijske mikrobiote, za identifikaciju aktinomiceta i knokarda; 3) Bojanje prema metodi Cily-Nilson ili modifikacije metodom Kinone - da se identifikuje mikroorganizme otporne na kiselinu, prije svega, za indikaciju i diferencijaciju sa tuberkulozom s mikobakterijima, kako bi otkrili patogene lepre, Knopša i spornog kvasca.

PAS-metoda (Schiff-jodna kiselina) uključuje identifikaciju neutralnog polisaharida u zidovima mikroorganizama. U zidovima većine eumitzeta nalazi se glucan-mannan kompleks u jednoj ili drugoj koncentraciji, zbog kojih se javlja bojenje.

Prokariote (bakterije) su RAS-negativni, uključujući one koji su zainteresirani za mikrološku aktinumicete i knokardiju. Međutim, u formiranju aktinomikotičkih prijatelja formira se takozvani "cement", lijepljenje vegetativnog aktinogmycotic micelij u granulu, koji također daje i RAS-pozitivnu boju. U vezi s kojom je ova metoda primjenjiva i u dijagnozi aktinomikoze.

Rasko reakcija (i njena modifikacija) najvažnija je metoda dijagnosticiranja oblika tkiva gljivične infekcije. Metoda se temelji na oksidaciji glikoličkih grupa ugljikohidrata po jodnom ili hrome kiselinom. Jodna kiselina oksidizira 1,2 i 1,4 glikola u aldehidu i isključuje vezu između hidroksilnih grupa atoma ugljika. Aldehide grupe mogu se otkriti i uz pomoć Schiffa aldehide reagensa. U situ u zidovima gljiva nalazi se intenzivno bojenje heteropolisaharidnog kompleksa u ljubičasto-crvenoj boji (tehnika - vidi aplikacije).

Za suzbijanje boje okolne tkiva, tretman ("Counter-prerađivač") svijetlo zelene, methanyl žute, a slično se primjenjuju. U ovom slučaju otkrivaju se samo ćelije gljiva, što je vrlo korisno u fazi indikacije uzročno-agenta u tkivima ili u razmazima. Istovremeno, nije moguće suditi reakciju odgovora organizma i promjene tkiva na takve pripreme. Uvijek je potrebno imati paralelne pripreme koje su oslikali RAS metoda sa doktorskim hematoksilinom.

U praksi se u klasičnoj verziji ne koristi samo RAS metoda, već i njegove različite izmjene: oksidacija kromirane kiseline (umjesto joda) je bauer reakcija, slikanje prema Gridlijama prema Gomori -Groott metoda. Svi se uspješno koriste za otkrivanje oblika tkiva gljiva, a zasnivaju se na istom principu (tehnika - vidi apsponciju). Tabela 3.

Tabela 3.

Tinnitorijalna svojstva tkanine gljive

(u patološkom materijalu, u histološkim odjeljcima)

Oportunističke miose

Metode otkrivanja

Kandidijaza Ras ili slikarstvo Gridli
Aspergillez Hematoksilin i Eosin, utisak za homori groot
Zigomikosis Hematoksilin i Eosin
Kriptokokoza Alciana Blue (prema Mururi metodi) + Ras-reakcija + hematoksilin
Pneumocistoza Bojanje prema metodi Bauer-a, impregnacije homori grootta, boja tione
Fusarioza Bojanje prema metodi Romanovskog gimsija, metodom Wright-a
Soporioz
Trihospoporis Hematoksilin i Eosin, slikajući prema metodi Romanovskog-Gimsea
Feogiphykoza i kromomikoza Hematoksilin i Eosin
Primarni patogeni miose: Metode otkrivanja
Cocidioidosis Ras -rukcija + hematoksilin
Histoplazmoza utisak na Homorie-Grokott, slikanje metodom Bauer-a, slikajući metodom Romanovskog-Gimsea
Sjeverna američka blastomikoza
Parazkoccidiodosis Rasko reakcija, impregnacija za Gomori Growott
Adiaspiromikosis Hematoksilin i Eosin, reakcija Ras
Pseudomikoza: Metode otkrivanja
Actinomicosis Hematoksilin i eozin, bojanje prema gram-verderod metodi
Nokardioza bojanje prema metodi Cyil-Nielsena, prema metodi Kinona, prema metodi grama.

Pod pretpostavkom dijagnoze "kriptokokozoze", preporučljivo je primijeniti metode specifičnog otkrivanja kapsule Cr.neoformans.koji sadrže glikozaminogkane (kiselina polisaharida). U tu svrhu koristi se boja alzian plave (prema Mururi metodi), glavna smeđa (prema Sobichu metodi), mudigarmina boja. Trostruka boja je vrlo korisna: RAS reakcija, zatim tretman alzian plavom, zatim hematoksilinom. U ovom slučaju postaje moguće razlikovati kriptokoke i tkivne oblike ostalih gljiva koji imaju sličnu morfologiju.

Opis patološkog materijala (histološki pripravci) uključuje podatke o morfologiji i veličinama tkiva oblika gljivica, njihove tinktivijske karakteristike, odnos prema tkivima vlasnika, prisustvo fagocitoze, određivanje prateće mikrobiote.

2.2. Sjetva patološkog materijala i kvantitativno računovodstvo ćelija u Mikosakhima uzrokovanim gljivama kvasca

Dobivanje usjeva gljiva potrebno je identificirati i odrediti osjetljivost na antifungalne lijekove.

Vlažno prije studije od 5-10 minuta homogenizirano je treseći sterilnim perlama. Ako ispljuvak sadrži puno sluzi i slabo je homogeniziran, 1-2 ml sterilne fiziološke otopine može se dodati u njega. Spustum mikroskopa u matičnim ili oslikanim preparatima. Ako je tokom mikroskopije ispljuma s velikim povećanjem vida vidljive elementi gljivice, tada ga treba posijati u razrjedu 1:10, 1: 100, 1: 1000, ako su elementi gljivice Nije otkriveno, ispljuvak se zaplijenjuje ne razblažen. Razrjeđivanje se pripremaju u tečnom hranjivom sajmu (Wort, Saburo, 1% peptona voda) ili u sterilnom fiziološkom obliku. Iz svakog razrjeđivanja sjetve proizvodi 0,1 ml sa lopaticom za 2 šalice Sushlo-agara, Agara Saburo ili MPa sa dodatkom antibakterijskih antibiotika - penicilin i streptomicin, biomicin (100-200 jedinica / ml srednjeg). Hranjiv medij je prethodno sušen u termostatu na +37 S, jer U prisustvu kondenzata, rast kolonija može imati karakter odvodnje. Sevs se inkubira u termostatu na + 37 ° C 48 sati. Zatim, ako je rast iste vrste kolonija kvasca, proizvode svoje kvantitativno računovodstvo. Izračun broja kvasca (n) u 1 ml ili 1 g materijala u studiji izrađen je prema formuli n \u003d ABC, gdje je prosječni broj kolonija na jednom Petriju, b \u003d 10 na Zapremina sjemenskog materijala 0,1 ml, stepen uzgoja izlučivanja (10,100,1000).

Primjer izračuna: na šalicama s razrjeđivanjem 1: 1000 povećana je za prosječno 60 kolonija, a u 1 ml proučarenog izlučivanja sadrži 60 x 10 x 1000 \u003d 600000 ćelija kvasca.

Lopta, pranje tekućine bronhija, gaymorh šupljine, žuč (posluživanje a, b, c), soka za gastrični sok, duodenski sadržaj, urin prebačen u centrifuge cijevi i centrifugiranim 10-15 minuta, nakon čega je supernatant tekući Kretanje. Iz sedimenta pripremite domaće lijekove za mikroskopiju. Ako se tijekom mikroskopiju, bilije kvasca nalaze u svakom pogledu, tada se sjemena proizvode u razrjeđivanjima 1: 100 i 1: 1000, 0,1 ml po gustim hranjivim medijima i inkubira se u 37 sati. Ako tokom mikroskopije sedimenta , Stanice kvasca nisu otkrivene, taloženje tiho bez uzgoja. Količina flore kvasce izračunava se na 1 ml patološkog materijala.

Fekes se uzima mjerljivom kašikom u iznosu od 0,2 g, postavlja se u 1,8 ml tečnog palica i temeljito učvršćena staklenim štapom. Rezultirajući uzgoj (1:10) procjenjuje se 5-10 minuta, 1: 100, 1: 1000, sjeme u zapreminu od 0,1 ml po 2 šalice Petrija sa agariziranim medijima. Računovodstvo za količinu flore kvasce proizvodi se na 1 g izmeta.

Cerebrospinalna tečnost. Karakterizira ga izgled (proziran ili mutan, bezbojan ili oslikan, prisustvo nečistoća u krvi, talog). Mikroskofi pokazuju se likvore sediment nakon njenog centrifugiranja. Pripremljena su tri lijeka: Native - u kap sterilnom fiziološkom rješenju: izvorno - u kapi leševa i udaraca za slikanje slikanje RS-metodom, gramom i matenjem plavom u Mouriju.

Mikroskopija cerebrospinalna tečnost U matičnim i slikanim lijekovima omogućava vam uspostavljanje stanice i fragmenata kvasca i fragmenata micelija gljiva ili bakterije koje uzrokuju gnojni meningitis (meningokok, pneumokok, hemofilni štapići itd.). Kapsula gljiva može se otkriti u preparatu za pirjanje Cryptococcus Neoforma). Istovremeno, na sivoj pozadini leševa, šale se ćelije kvasca vidljive, okružene laganim halo kapsulama. Oblik kvasca može biti i u cijevima Candida AlbicansNema lagane halo kapsule oko kaveza.

Cr. Neoformamani. Može se otkriti i pomoću boje alzian plave (u mouri). Boja se događa zbog selektivnog otkrivanja kapsule heteropolisaharide Cr.neoformans.. Kada se priprema bakterijske flore otkrije u gramu koju je slikao gram, daljnja studija cerebrospinalne tekućine vrši se prema odgovarajućim bakteriološkim tehnikama. Nakon mikroskopije, talog stvara tečnu sjetvu na 3 šalice svježe pripremljenog, sušenog Wort-agara ili agar saburo, kao i tečnog saburo ili tečnog saburo-a. 2-3 kapi tečnog sedimenata nanosi se na površinu hranljivih agara tekućine i temeljito trlja lopaticu i sjetvu 1 padu u tri točke na površini agar agara za otkrivanje micelija gljiva. Preostala tekućina prenosi se na 5 ml tečnog bradavica ili agar saburo. Usevi su inkubirani na dva načina temperature: šalica 1 - na +37 o C, i čaše 2 i 3 i sjetve na tečnom mediju - na +28 ° C - +30 o C. SOW na temperaturi od +37 ° C View 2 i 5 dana, a na 28 - 30 ° C - na 4.7.10 dana rasta. Ako na 5 dana na temperaturi od +37 ° C i 10. dana na temperaturi od 28-30 o rastom, nije primijećeno, proizvedeno iz tečnog hranjivog medija do šalica s bračnim ili agarom Saburo. U nedostatku rasta flore kvasce, rezultat tečnog sjetve bilježi se kao negativan.

Odvojena fistula. Studija započinje mikroskopijom materijala u matičnim ili slikanim lijekovima. Zatim napravite materijal za sjetvu na agar medijumu (wort ili saboo), za koji se 2-3 kapi odvojene i lopatice podijeljene u površinu agara. Sevke se inkubiraju 48 sati na + z7 o S.

Odvojene sluznice.

1. Tampon se nalazi u cijevi sa 2 ml tekućeg medija (Wort, Saburo ili MPB okruženje) i tresti 5-7 minuta, bez utikača. Pripremite razrjeđivanje 1:10, 1: 100 i sjemenki sa 0,1 ml svake uzgoju u dvije šalice Suslo-agara, Agar Saburo ili MPa. Sjetva na gustim medijima i cijevi sa tekućim medijima sa tamponom (za obogaćivanje) inkubiraju se na temperaturi od +37 C. Nakon 48 sati, broj kolonija izračunava i približno određuje broj ćelija kvasca koje je tampon preuzeo tampon. Za to je broj odraslih kolonija pomnoženo sa 20 i za uzgoj. U nedostatku rasta kolonija na šalicama odvedenog iz preuzete, ponovno okruženi iz srednjeg obogaćivanja za jednu šolju sa Wort-agarom.

2. Sjetva se može izvršiti provođenjem tampona s rotacijom preko površine hranjivih medija. Istovremeno, iznos kolonija kvasca se ne uzima u obzir, a bilježe se samo prisustvo i intenzitet rasta: pojedinačne kolonije, značajan ili čvrst rast, nedostatak rasta mikrobiota.

Krv. Uzorci venske krvi za dobivanje gemokulture potrebno je razrijediti sredstvo za obogaćivanje, najmanje 1: 5 tako da baktericidna svojstva krvi ne inhibiraju rast gljiva. 5-10 ml sveže krvi, respektivno, u 50-100 ml hranjivih sastojaka, respektivno (tečni saburo sa 2% glukoze ili klinastom kitorom po svojoj regeneraciji). Za sjetvu možete uzeti krv antikoagulant (1:10 5% natrijum-citratno rješenje). Sevge raste 10 dana na +37 ° C sa sažombom kontrole do 5 i 10 dana. Sterilna pipeta uzima talog, 3 kapi od kojih mirišu bakteriološku petlju preko površine Wort-agara u Petriju. Sjemeljene čaše smještene su u termostatu sa temperaturom od +37 ° C za 2-5 dana. U slučaju rasta, flora kvasca izdaje preliminarni odgovor na prisustvo gljiva u krvi, a kultura je određena rodu i vrstama.

Druga metoda sjetve opisana je na Mikoflori (H.RIETH). U ovom slučaju sjetva 5-10 ml krvi proizvodi kapi. 40-50 kapi krvi nanosi se na površinu gustom hranjivom medija u petri šalici Petrija, na udaljenosti od 0,5 cm između kapi. Sjetva se proizvodi na dvije šalice Petrija, inkubirajući u jednoj šolji na temperaturi od +37 o C, a u drugoj temperaturi u sobi za 2-5 dana.

Komadi tkiva organa. Napravite ispis sa ispitnim komadom tkanine na površini gustom hranjivim sastojcima u Petrijskoj jelo, a zatim proizvesti loys. Isti komad tkanine nalazi se u 50 ml tečnog hranjivog sastojka (Suslo, Saburo srijeda). Sevke se inkubiraju u termostatu na temperaturi od +37 ° C u roku od 5 dana.

Pahuljice za kožu i noktiju. Vaga za sjetvu proizvodi bez obzira na rezultate mikroskopije. Za ovu sterilnu mirku, navlažena u srednjoj kondenzaciji, pahuljice se prebacuju u testnu cijev na izgrađenom Wort-agaru u 2-3 boda, pritiskajući ih na površinu medija. Ovisno o broju materijala koji je ušao u studij, sjetva se vrši u 2-3 ispitne cijevi. Sevke se inkubiraju u termostatu na temperaturi od 28-37 ° C do 5 dana.

Brže metode identifikacije se široko koriste. C.Albicans.. Ova vrsta može formirati cijev za klipe i kratke pseudomatičke teme nekoliko sati (2-4 sata na 37 o c) na serumu, bjelančevinama jaja, na mediju za igle, za 199 medija, itd. Praktično u laboratorijama koji su koristili ljudski serum (ostaci iz seroloških reakcija), gdje se u 37 o C formira cijev spike, a nakon 24 sata, pseudomatiju. Za vrstu C.Albicans. Ova pojava je karakteristična za 90% slučajeva. Rosts se rijetko formiraju C.Tropicalis.

2.3. Mikroskopski pregled i sjetva patološkog materijala u sumnjivim mikozama uzrokovanim gljivama kalupa

Patološki materijal može se ispitati u matičnim i slikanim drogama. Predmet i naočale premaza namijenjene za pripremu mikrodova, trebaju se pohraniti u mješavinu alkohola s etrom (1: 1) kako bi se izbjegla kontaminacija micubijumskom zrakom. Prije upotrebe, supstancirane i obložne naočale steriliziraju se preko plamena plamenika.

Mikroskopski materijal

Mikroskopy isptum. Za pripremu izvornih lijekova, ispljuvak se prenosi na sterilnu šalicu Petrija i pogled na crnu pozadinu za otkrivanje malih čestica (kvržice). Pumpe mogu biti gnojne, gnojni sluz, gnojni krvavi. Dimenzije kvržica variraju u veličini u promjeru 0,3-3 mm, boja ih može biti siva, žućkasta, zelenkasta. Za pripremu izvornih mikrodruga, pojedinačne kvržice prenose se taloženim iglicama ili bakteriološkim petljima u kapi alkohola sa glicerinom ili padom 10% rješenja. Pokrijte sa staklom premaza, slabo je pritisnuo igla za usisavanje i mikroskopiju u malom (1:80, okular 10 x i objektiva 8x) i veliki (1: 400, okular 10x i objektiv 40x) povećava se u mikroskopu.

Pripreme za pranje vode, eksudate, kao i žuč, urin, sok za gazmu, alkohol se priprema iz izvornog sedimenta ili iz sedimenta koji proizlaze iz centrifugiranja (na 1500 o / min u 5 minuta). Sediment pipeta petlje ili parser nosi se na pad od 10% tonasenskih rješenja na klizaču, prekrivenom staklom premaza i smatraju se malim i velikim koracima mikroskopa.

Za pripremu obojenih preparata, studirane kvržice ili pad taloga ravnomjerno se distribuiraju priprerciratima ili tanka stakla manje veličine preko površine sterilnog slajda za proizvodnju tankog razmaza. Rezultirajuća razmaza se osuši u zraku, fiksiran metil alkoholom ili mješavinom Nikiforova (jednakim dijelovima 96% etil alkohola i etera) 3-5 minuta, ili trobojnim ispiranjem preko plamena plamenika. Fiksni udari obojeni su u gramu, raš metodu, kalcafluoroma bijeli. Oslikani mikroskopski lijek pomoću mikroskopskog uronjenog sistema (1: 900, okular 10x, objektiv 90-ih).

Materijal za sjetvu

U studiju bilo kojeg patološkog materijala na micelizalnim gljivama, zasija se na gustom mediju saburo ili gnoji s dodatkom penicilina i streptomicina (100-200 jedinica / ml srednjeg mjesta). Sjetva se proizvodi u dva ponavljanja, s obzirom na različite temperaturne načine uzgoja micelijalnih gljiva (+37 ° C i +28 ° C), uvijek u 3 boda u sredini šalice. Vrijeme inkubacije je 4-5 dana.

Sputum (odabrani kvrživi) prenosi se na bakteriološku petlju ili parser pipetu na površini Saburo ili Susl okruženja. Sjetva olovke sa olovkom sa stražnja strana Dno Petri Šapa. Petri suđe smještene u termostatu.

Nakon određenog termina inkubacije, posmatrane šalice se gledaju, a kultura gljiva određuje se kada se otkriju kozioniranje. U nedostatku suncobrana, gljivica se stavlja na diferencijalno okruženje Chapeca za dalju identifikaciju.

Tanak ploča vode bronhija, gaymorh šupljina, eksudata, urina, soka za gastrični sok (maternji ili nakon centrifugiranja) uzima pipetu i sijaju se u količini od 0,1 ml. Izmet se razvode 1:10 (1g izmet i 9 ml tečnosti) u tečnom mediju sa saburo ili tekućim sterilnim izotoničnim otopinom natrijum-hlorida, emulgiran, odbrani 10 minuta da se precipitaju velike čestice, sjemenke supernatant u jačini 0,1 ml. Odvojeni vanjski prolaz i ZEA, koji se uzimaju tamponom, sito, temeljito provode svaku stranu tampona na površini hranjivog medija. Možete se prasati sa tamponima. Da biste to učinili, tamponi su smješteni u 10 ml tečnog medija saburo ili tečnog gnoja sa staklenim zrncima i emulgiranim 10 minuta, 0,1 ml ispiranja sa tamponom sa travnjakom (od strane Leshchenka V.M., 1973) ili tri boda.

Pahuljice kože i noktiju postavljaju se na površini hranjivih medija, temeljito ih pritisnem.

Sediment cerebrospinalne tekućine (centrifuga na 1500 o / min za 5 minuta) posipane su dvije šalice srednjeg sredstava od 0,1 ml, a njen ostatak proliva se u srednjoj strani obogaćivanja (tečni medij saburo ili tečni), prolive se u skladu s testom Cijevi u zapreminu od 5 ml. Setene čaše se inkubiraju kao i obično, a testne cijevi sa sjetvom na srednjoj strani obogaćivanja - na + 28 ° C za 10 dana.

U slučaju rasta micelizalne gljive na gustim medijima, kultura se utvrđuje iz ove sjetve, u nedostatku rasta na Saburo-Agaru ili Wort-Agaru, gljivica se proučava iz okruženja obogaćivanja. Za to je kultura gljivica postavljena još jednom na diferencijalni uski medij kapelja i u budućnosti identificirati.

Iz komada tkanine za tijelo (biopsija, obdukcija) napravite otisak na površinu gustog medija sa izdvojenom stranom proučarenog komada u tri boda. Istovremeno, komadi tkiva nalaze se u 50 ml tečnog hranjivog sastojka (Saburo, Wort).

Krv se ispituje sumnjim od gljivice u dva - tri ponavljanja. 5 ili 10 ml krvi su zasijane, u 50 ili 100 ml saburo tekućeg medija sa 2% glukoze. Usevi se uzgajaju na +37 s i +28 C za 10 dana. Prvo gledanje usjeva provodi se za 5 dana, drugi - nakon 10 dana. Petog dana možete promatrati rast micelilne gljive u obliku osjetljive kvržice na dnu i površinskog filma. Fungne se postavlja na diferencijalni medij Chapeca kako bi odredio rod i vrstu gljiva. Ako se na 5 dana nije primijećen rast gljivice, usjevi se čuvaju do 10 dana i u nedostatku rasta, rezultati studije registar kao negativan.

Prilivom tri boda, rast gljiva u dva i tri boda definiran je kao dijagnostički značajan, u jednom trenutku - nasumično. Ako je potrebno, moguća je ponovljena sjetva.

Identifikacija odabranih usjeva kalupa gljivica

Nakon odabira kulture, micelijske gljive postavljaju se na diferencijalnu srijedu kapecu za generičku i, ako je moguće, određenu definiciju.

U praksi dijagnostičkih laboratorija, u pravilu se koriste kulturni morfološki kriteriji identifikacije: procjenjuje prirodu rasta kulture gljiva na agerifičkim medijima (dijagnoza kulture, makromorfologiju) i mikromorfologiju gljiva.

U teškim slučajevima koriste se dodatne metode dijagnoze (studija enzimske aktivnosti, temperaturne karakteristike rasta kalupa gljivica).

Koncept makromorfologije (potpisnici kulture) uključuje strukturu kolonije (lepršavi, filc, baršunast, web, vunasti, kotrljajući, praškasti itd.), Površinu (ravna, presavijena, bučna, kupola, pigmentacija, pigmentacija od kolonije gljiva i supstrata (razne nijanse zelene, plave, ljubičaste, crne, sive itd.), prisustvo edudacije na površini kolonije.

Mikromorfologija kulturne gljive proučava se drogom, koji, ovisno o generičkoj pripadnosti, gljivica se priprema na sljedeći način: kap tečne tečnosti nanosi se na staklo kože (jednaki dijelovi alkohola, glicerina i vode); Nalazi se u komadu gljiva mikrom iz kolonije u obliku trokuta s hvatanjem središnjih i perifernih dijelova, dvije igle vakcine šire se komad s oprezom kako bi se izbjeglo formiranje mjehurića zraka. U nekim slučajevima (Muko i Rizopus), prilikom pripreme lijeka, fungne se nalazi na suhog kliznog stakla, na nje se na njega nanosi pad tekućine i prekriveno staklom premaza. Pripreme se gledaju pod mikroskopom na malim i velikim zumima. Supstrat i micelij zraka studiraju, primijeti se prisustvo ili odsustvo septa (particija), obratite pažnju na prirodu pljosne: Conidionas sa Conidijem i sporancima sa SporansiPro.

Condiosenos su različiti u svojoj strukturi: od jednostavnog pojedinačnog spornog gif-a za razgranačene formacije stabala. Conediens su raspoređeni po jednu ili po grupama, primjetno su različite od vegetativnog gif-a micelejskog, bezbojnog ili obojenog, podizanja, pregrešenog, padajućeg, oštrenja. Oni se mogu sastojati od jedne ćelije i od velikog broja različitih ćelija i veličine ćelija, od kojih svaka ima svoje ime. Na primjer, na vrsti Aspergillusa, konidioner se sastoji od sljedećih ćelija: noge, mjehuriće natečenih, sterigma, lanca konizije. U rodu penicillium, Consionioneer ima oblik jednostavnih ili složenih četkica, koji se sastoji od različitih ćelija: blizanci, mesul, falide, lanci konizije.

Na pljuskivim gljivama sluznica i kolika rizopusa u obliku sporanca sa endosposporangios. Spoorgija je na kraju sporangiensh. Sporanke o sferičnom ili krušku obliku, u većini sa posebnim stupcem, koji je nastavak sporangienika unutar sporangijuma. SporangiPro zaobljen, bezbojan ili oslikan.

Konidija (kontroverza) u kalup gljive polimorfnim (cilindričnim, sfernim, ovalnim, elipsoidnim, jastučnim, pearnim oblikovanim, muškim) jednokrevetnim i višeikelulijskim, variraju u veličini i boji, pojedinačni, lanci ili su prikupljeni u glavama i ugrađeni su. Površina konindijuma može biti glatka, gruba, oguljena, bradavica, čekinja itd.

Mikroskopski pregled i sjetva patološkog materijala u Mikosakhu uzrokovane dimorfnim gljivama

Uz ove metode potrebno je uzeti u obzir dimorfizam patogena.

Patološki materijal za primarne patogene mikotske infekcije, pakocidioidoza, severna američka Blastomikoza), kao i hromomikoza, spider-a i mitzetom mogu biti gnoj, ispljuni, ostaci sa peptičnim lezijama na koži i sluzoko komadi iz žarišta.

Poteškoće u određivanju patogena ovih mikoza je da će zbog mikroskopije patimatterske patimatterije naći oblici gljivica, najčešće kvasci različite morfologije ili sferule sa endosporskim, potpuno različitim od elemenata iste gljive , izvađen iz njegove kulture koja je odrasla na temperaturi od +28 - +30 ° C na konvencionalnom agavi saburo, sa pH vrijednosti bliže kiselinom. Međutim, treba imati na umu da se neki dimorfni gljivice mogu dobiti i u kulturi faze kvasca rasta gljivica, često podsjećajući na njen oblik tkanine, ali prilikom rasta i na medije bogatim proteinima sa slabom alkalna reakcija (pH \u003d 7,6 - 7,8), na temperaturi od 37 o C.

Gore navedeno se odnosi na gljive: Histoplasma Capsulatum, Blaskomice dermatatitis, parakocidioides Brasiliensis, kokcidioidi imitis i Sporothrix Schenckii.

Laboratorijska dijagnoza mikoza uzrokovanih gljivama koje su ovdje spomenute zasnovana je na otkrivanju oblika tkiva u patološkom materijalu tokom mikroskopije, razdvajanje kulture patogena i njegove identifikacije po morfološkim karakteristikama kulture.

Mikroskopski pregled se proizvodi u ne obojenim preparatima na tabolju u padu 10% alkalnog metarskog rešenja ili mješavine alkohola sa glicerinom jednakim količinama ili u obojenim potezima (tablica 3).

Sjeme patološkog materijala proizvedeno je na gore navedenim hranjivim sastojcima u Petrionu posuđe koristeći bakteriološku lopaticu prema općenito prihvaćenoj tehnici.

2.5. Mikroskopski pregled i sjetva patološkog materijala u dermatomikozi (keratomikoza i dermatofiza).

Predmet studije su površinske mikroze, koji utječu na samo keratinski sloj epidermisa i dermatofita, koji utječu na kožu i njegove dodatke (kose, nokti), čiji su patogeni gljive koje pripadaju porođaju Trichophyton, mikrosporum i epidermophyton.

Laboratorijska mirska istraživanja uključuje iste faze kao i kod ostalih metoda: mikroskopija materijala i dobivanje čiste kulture prilikom sjetve. Pravilni materijal se izuzetno utječe na uspjeh mikroskopije i kulture.

Patološki materijal se istražuje u sljedećem trenutku nakon uzimanja. Pretpostavlja se u tri dijela: za mikroskopiju, uzgoj i ponovno učenje. Mikroskopija patološkog materijala je najlakša i najbrže metoda za uspostavljanje prisutnosti gljiva u tkivima. Zružen materijal postavljen je na sredinu predmeta u kapi 10-20% od CON-a i lagano zagrijane preko plamena alkohola dok se bijeli obruč bude dobije do ruba pad, pokriti sa kapljicom i Odlazite za 5-10 minuta (kosa, vage kože) i 30 minuta (nail) za maceraciju i prosvjetljenje; Materijal se može obraditi bez grijanja, za to je lijek ostavljen u 20% CON-a za 30-60 minuta.

Mikroskopski prvo pod malim, tada veliki porast mikroskopa.

Kulturno istraživanje je potrebno za isticanje i identifikaciju patogena. Materijal je tako što je više moguće i padne u minimalne količine na bežaju na agaru u cijevima od 2-3 boda na udaljenosti od 1-2 cm. Materijal jednog uzorka je zasijao najmanje 2-3 cijevi ( Kosa) i 4-5 cijevi (vage kože i noktiju). Za primarnu izolaciju dermatofita, najbolje je koristiti standardni agarizirani saburo medij sa 2-4% glukoze ili wort agar koji sadrži antibakterijske antibiotike (penicilin 50 μg / ml + streptomicin 50 μg / ml ili biomicin 200 / ml) i anti- Flap antibiotik Aktidion (cikloheksimid) 0,1 - 0,5 mg / ml. Aktidion ne utiče na rast dermatofita i suzbija mnoge gljive kalupa, kao i vrste Candida i Cryptococcus.

Sevke se inkubiraju u 22-30 o C (samo 28 o c). Pojava rasta dermatofita označena je od 4 do 12 dana inkubacije na sjetvu bodova duž ivica izrađene materijala. U nedostatku rasta 30 dana, rezultati kultivacije smatraju se negativnim. Prema optimalnim uvjetima, primarne kulture mnogih dermatofita mogu se identificirati za 7-10 dana nakon sjetve, ali nadgledaju potrebne usjeve u roku od 20-30 dana. Primarne kulture raste relativno sporo i kada se koriste mediji bez antibiotika, dermatofiti se mogu suzbiti brže rastućim bakterijama ili gljivama pljuskovima. Kada rast u primarnoj sjetvi, potrebno je oduzeti od ruba kolonije na svježi diferencijalni medij za dobivanje čiste kulture koja će poslužiti kao materijal za identifikaciju namjenskog dermatofita.

2.6. Serološke metode dijagnoze mikoza

Vrijednost seroloških metoda uglavnom je u sljedećem: identifikaciju pacijenata s vjerovatnim invazivnim metodama; Potvrda mikotske prirode alergijskih bolesti; Screening ankete o riziku razvoja mikoza.

Lažan pozitivni rezultati U svijetu su mogući serološki uzorci i zdravi ljudiSenzibilizirani antigenima gljiva, negativni uzorci mogu biti u imunodeficijenciji čak i na pozadini pojavljivanja invazivnog mikoza.

Rutinska općenito prihvaćena metoda serološke dijagnostike mikoza
Dovoljno je detaljno opisano / /p.n. Kaškin, V.V.Lysin. "Praktičan
Medicinski mikrološki vodič, Medicina, 1983 /. Međutim, u posljednjem
Desetljeće su se dogodile uočljive smjene u metodološkim pristupima / Elinov n.p.,
2001 /. Predloženi su originalni postupci otkrivanja antigena i antitela.
Neki metaboliti ćelija gljiva; Stvorena posebna dijagnostika
Komti ("kitovi"), na primjer Pastorex ® Candida, za određivanje
Reakcije "Lateks-aglutinacija" ponavljajućih oligomanskih epitopa antigenog
Strukture / izražavanje na velikom broju makromolekula
gljiva; Za određivanje antigen-mannana Candida, na primjer, u
Serum o pacijentima sa administracijom slatkiša, možete koristiti Platelia® Candida set.
Korištenje prvog skupa praga za određivanje antigenskih konstrukcija iznosi 2,5 NG / ml, koristeći drugi u snopu sa _____________ metodom praga određivanja - 0,5 ng / ml.

Patogeni mikoza najčešće se otkrivaju sa laboratorijskom proučavanjem različitih kliničkih materijala

Krv

  • Candida.
  • Cryptococcus
  • Mycelialni patogeni rijetko su otkriveni u krvnim testovima osim Fusarijum.

Spinalna tečnost

  • Candida.
  • Cryptococcus

Pumpa, odvojena od apscesa, čira itd.

  • Candida.
  • Cryptococcus
  • Fusarijum.
  • Aspergillus.
  • Sporotrix.

Respiratorne tajne (Mochota, lopta, bronhijalna brašna Biopsija, transrejalni aspirat)

  • Aspergillus.
  • Candida.
  • Cryptococcus
  • Mukor.
  • Scedosporium.
  • Rhizopus.
  • Sporotrix.

Odvojeni, biopsijski materijal iz rana

  • Aspergillus.
  • Candida.
  • Fusarijum.
  • Rhizopus.

Ostali biosubstrati

  • Candida.
  • Cryptococcus

Materijal napravljen od torakalne, trbušne šupljine; Sinovijska tekućina

  • Aspergillus.
  • Candida.
  • Fusarijum.

Staklasto tijelo

  • Candida.
  • Aspergillus.

IV. Dijagnostički kriteriji sistemski Mikosov: Klinički i laboratorijski parametri konačne dijagnoze

Ezofagitis

  • dostupnost karakterističnih promjena u ezofagoscopiji
  • identifikacija gljiva u uzgoj biopsije materijala
  • prisutnost pseudomitecije u oslikanim potezima ili znakovima invazivnog rasta gljiva u biopsiji

Upala pluća

Pneumonija, zbog Candida spp.

  • akutno nastaju infiltrativne promjene na radiografiju pluća koji se podudaraju sa kliničkim manifestacijama gljivične pneumonije
  • detekcija Candida spp.Kada uzgajate materijal iz donjih odeljenja respiratornog otpada dobivenog tokom transhokalne biopsije, transbranhijalne biopsije, otkrića lagana biopsija ili torkosopski režirana biopsija
  • otkrivanje pseudomatije u adekvatno obojenom biopsijskom materijalu

Pneumonija, zbog Aspergillus spp., Fusarium spp., Scedosporium apiosfermum

  • identifikacija elemenata gljiva u tkivima i pozitivnoj kulturi
  • persoiziranje ili progresivno infiltrirati u plućima, otporan na antibakterijsku terapiju
  • otkrivanje jednog od navedenih patogena u uzgoju ispljunja ili lopte
  • klinički znakovi pneumonije (kašalj, nedostatak daha, "pleuralna" bol, kih, buka trenja
  • karakteristične promjene u radiografiji ili CT plućima:

Potpuno infiltrativne, nodule, akutne ili kavernozne promjene

Simptom "haloe" sa CT plućima

Napredovanje infiltrativnih promjena u formiranju šupljina i pojava simptoma bolesti

  • nedostatak drugih patogena prilikom uzgoja lopte koja bi mogla uzrokovati dostavljene promjene u plućima

Sinusitis

  • klinički i radiološki znakovi akutnog sinusitisa
  • mikroskopski i kulturni znakovi Mikoše u studiji aspirata ili biopsije materijala

Infekcije urinarnog trakta

  • identifikacija\u003e 1x10 CFU / ml sa ponovljenim usjevima pravilno sastavljenog urina

Fungmia

  • Jednokratno otkrivanje gljiva prilikom obrezivanja krvi tijekom razdoblja podizanja tjelesne temperature\u003e 38 o C

Akutna diseminirana mikoza

  • Fungmia u kombinaciji sa kulturnim ili histološkim znakovima lezija dubokih tkiva (uključujući potkožno tkivo) ili identificiranje patogena iz dva u normi sterilnog biosubstrata

Endofthalmita

  • oftalmološki znakovi endoftAlmita
  • identifikacija patogena iz očiju, krvi ili druge žarišta širenja

Apsces ili osteomijelitis

  • rendgen / CT / MRI znakovi osteomijelitisa
  • otkrivanje uzročnog agenta u aspiratu ili biopsijskom materijalu

Meningitis

  • utvrđivanje promjena CMF-a kojim se potvrđuje prisustvo upale i identifikacije gljiva tokom mikroskopije SMF-a
  • identifikacija gljiva u odnosu na usjeve ili definicija antigena Cr.neoformans, Candida i Aspergillusu SMG

Hronična distribuirana (hepatolyenal) kandidijaza

Mogući

Dokazan

  • gore navedeno u kombinaciji sa postojanjem Candida spp.od krvi na izgled znakova lezije jetre, slezine ili bubrega ili sa kulturnim, histološkim znakovima kandidijaze u biopsiji iz žarišta

V. Putevi gljivičnih infekcija

Postoje različiti principi za klasificiranje gljivičnih infekcija i njihovih uzročnika. Čini nam se gotovo najlakšim i prikladnima da podijelimo patogene gljivice na 5 glavnih grupa:

1. patogeni površinskih mikoza;

2. Dermatomikoza patogeni;

3. patogeni potkožne mikoze;

4. Patogeni dubokih mikoza (primarni patogeni mikromiceti, uzročni agensi oportunističkih infekcija).

5. Pseudomikoza patogeni.

* Treba naglasiti da patogeni prve tri grupe u imunosuppresanim pacijentima mogu biti uzrok funkmia i polikatanih lezija.

Opis uzročnika mikoza u sljedećim odjeljcima, dajemo jedinstvenu shemu: njegovo ime prema usvojenoj nomenklaturi, popisu sinonimi, makroskopske karakteristike u medijima i mikroskopskom karakteristikom elemenata Gljiva vidljiva je pod mikroskopom u izvornim pripremama i od kolonija. Dati su i podaci o raspodjeli gljiva u prirodi, a na popisu su i bolest uzrokovana.

Prema statistikama, oko 20% stanovništva naše zemlje na ovaj ili onaj način pati od mikoze. Ali nisu svi tretirani za profesionalnu pomoć. Jedan od razloga je da ljudi jednostavno ne znaju sve simptome i manifestacije ove bolesti.

Simptomi Mikoše

Prije svega, vrijedi napomenuti da - to nije neka vrsta određene bolesti, već skupina različitih gljivičnih lezija kože i njegovih dodataka. Stoga simptomi mogu biti prilično raznoliki, ali najčešće se bilježe na sljedeći način:

  • Pojava piling mrlja na koži. Najčešće se pojavljuju između prstiju nogu, na prestaju kože. Često izazivaju svrbež, iritaciju i druge senzacije osjećaja.
  • Promjena boje i strukture noktiju. Oni postaju žućkast, krhki, drobljenje i hodaju, njihova površina može biti buggy i neujednačen.
  • Pukotine na koži. Često, s gljivičnim lezijama kože kože, zaglavi se i počinje puno puknuti.
  • Neugodan miris. Mnogi pacijenti žale se na neugodan miris pogođene kože, posebno kada je papa mikoza.

Kad se takvi znakovi pojave, potrebno je što prije posjetiti dermatolog i izvršiti punu dijagnostiku kako bi se utvrdila koja vrsta Mikoše udari kožu.

Metodologije dijagnoze mikoza

Kad se pacijenti pretvore u dermatolog sa karakterističnim znakovima gljivičnih lezija kože, najčešće je inicijalni vanjski pregled ljekara dovoljan da napravi dijagnozu. Jedino je pitanje upravo kakvu vrstu Mikoše udari kožu.

Te su informacije neophodne za određivanje daljnje strategije liječenja. Za dijagnozu metoda mogu se primijeniti takve tehnike:

  • Istraživanje ispod drvne lampe. Poseban spektar ultraljubičastog svjetla omogućava vam utvrđivanje prisutnosti gljivičnih lezija. Ova metoda je vrlo jednostavna i pristupačna, s njom, ne možete samo dijagnosticirati, već i kontrolirati tok tretmana. Ali ne dopušta određivanje vrste Mikoše.
  • Mikroskopija. Jedna od najjednostavnijih i najčešćih metoda dijagnoze Mikosa studija je pod mikroskopom strugana gljivičnim tkaninama. Da biste to učinili, postavlja se na tobogan. Postoje dvije vrste istraživanja opsega: koristeći bojenje supstanci i korištenjem jasta.
  • Bakteriološka sjetva. Jedna od najtačnijih dijagnostičkih metoda je rezervoar sjetve na hranjivim medijima. Po izgledu i karakterističnim za odrastalo kolonije, ljekar može postaviti vrstu patogena. Nedostatak ove metode je trajanje, uzgoj kolonije može biti potrebno 2-3 tjedna. Pored toga, moguće je dobiti rezultat samo u pola slučajeva.
  • PCR dijagnostika. Ovo je jedna od najtačnijih i modnijih dijagnostičkih metoda, ali za određivanje vrste mitoze može zahtijevati nekoliko analiza, što zahtijeva određene troškove.

Vrijedno je napomenuti da je dijagnoza metoda potrebna da bi se najviše odredila efektivna metoda tretira ovu bolest. A ako nema mogućnosti da odmah posjetite stručnjaku, možete koristiti uslugu koju naša klinika pruža i

Vage ili kosa se stavljaju na klizanje (staklo treba biti odmašćeno) i izlivati \u200b\u200bjednu ili dvije tri kapi od 30% rešenja kaustične ili kaustične sode i poklopca sa staklom premaza. 2-3 minute, na lako grijanjem na plamen alkoholnog plamenika na lijeku, malo je pritisnuo staklo premaza prije formiranja
Sivo oblačno prilikom proučavanja ostataka. Kosa ne bi trebala biti uništena, samo se nabubre takvim zagrevanjem. Uz mikroskopsku studiju (povećanje od 100-200 puta) s zamračenim dijafragmom otkrivaju se gljivilji - sporovi ili niti micelijuma. Preduvjet za uspjeh mikroskopske studije je temeljnost rudarstva vaga i kose, koje bi trebale biti zatvorene od pogođenih žarišta posebnim pincetom (pinceta za trepavice). Neophodno je obratiti pažnju ne samo dobro vidljivom kosu, kore i vagama, već i za male primjetne ostatke kose (takozvane komolje) i crne tačkice koje se uklanjaju skalpelom ili histološkom iglom. Nikada ne smije biti zadovoljan naznakom pacijenta do mjesta porasta, potrebno je pažljivo ispitati cijeli vlasing.

U kosi, pogođenim Trudodofijom, gljivica sporova nalaze se lanac. Uz Microsporia, sporovi su mnogo manji nego s riser, lanci se ne savijaju i nalaze se izvan kose. Unutar kose se odvija iz septičke micele. Čini se da je kosa obučena u slučaju IV spora. Passmarts se promatraju polimorfni sporovi, grubi raznolike niti i obično mjehurići zraka (Sl. 48).

Istovremeno, gljivice ne utječu na sve kose u potpunosti, već ostaju netaknuta područja.
Da biste dobili materijal sa glatkom kožom, napravite struganje ostataka sa. Periferna područja oštećenja na oštre kašike ili skalpela. Struganje iz noktiju prikladnije je za proizvodnju oštrih medicinskih noža (skalpel), uklanjanje malih, ali dubokih dijelova sa unutarnja površina Ploča za nokte ili pisanje praha u obliku utjecaja s pohotnim pletenim pločama.
Početni materijal se kuha u cijevi s alkalijem, a zatim ostavi da stane u ovoj cijevi za sat do 12-20.
Nakon toga sadržaj su centrifugirani i talog se istražuje pod mikroskopom (metoda N. A. Chernogubov).
Gljivice su dobro uzgajane na umjetnim hranjivim medijima koji sadrže ugljikohidrate i supstance proteinskih prirode. Takozvana originalna saburo okruženje, pivo Wort, agar i povrće posebno su uobičajeni.

Laboratorijska dijagnoza gljivičnih bolesti zasniva se na otkrivanju gljiva i određivanju vrste i vrste. Sastoji se od dvije glavne faze: mikroskopske i kulturne studije.

Mikroskopski pregled

Mikroskopski pregled je prva i važna veza koja vam omogućava da potvrdite preliminarnu dijagnozu.

Uspjeh mikroskopske studije u velikoj mjeri ovisi o pravilnoj ogradi patološkog materijala. Za mikroskopsku studiju potrebno je odabrati kosu koja ima beskonačne znakove gljive lezije (dosadno, slomljene, zadebljane). Promijenjeno u izgled dlake uklonite epilatorske pincete. Da biste otkrili jednu zadivljenu kosu s mikrosporijom, možete koristiti fluorescentnu lampu s filtrom drveta (zelenkasto-plavi sjaj).

U odabiru začuđene kose možete koristiti niz dodatnih funkcija. Kosa pogođena mikroporumima, u bazi, ima sivi slučaj spora od outfit-a. U hroničnom trostrupnosti u debljini vaga, kratka siva su zakrivljena u obliku "zareza" i "ispitivački znakovi" pogođene kose, kao i "crne tačkice" (zadebljano crno, rođeno u ustima folikula začućene kose) . Sa infiltrativom arrogontnom triothetijom za mikroskopsku studiju, osim zahvaćene kose, možete koristiti gnoj i kore iz fokusa lezije.

Sa žarišta lezije kože za vrijeme microsporia, tricochy i mikoza ingvinalnih nabora pahuljica, potrebno je strugati iz periferne zone lezije, gdje je gljivica u više. Puhanje kose kože s vagama kože.

U istraživanju zadivljene kose tokom mikrosporive i tricochy-a skreće se pažnja na osobitosti rasporeda spora (unutar ili izvan kose) i njihovoj veličini. Ovi podaci omogućavaju u nekim slučajevima da razjasne dijagnozu, klinički oblik mikroze i epidemiologije.

Uz obrazac za međusobnu obrazac Mikosa Stop za mikroskopsku istraživanje koristi kožne pahuljice i fragmente mackerskih sogova. Odjeljak za nokte koji treba poduzeti za mikroskopski pregled ovisi o obliku onyhomikoze. Sa površinskim oblikom, morate napraviti struganje sa površine ploče za nokte.

Sa najčešćim distalnim bočnim oblikom, struganjem iz kreveta za nokte, od tanjira (subnumber hiperkeratoze) sa dijelom rezanja promijenjena ploča za nokte. Uz proksimalni podstavljeni obrazac za ogradu materijala koriste se posebne metode (prozori bušilice s Bormerom, biopsijom za nokte).

S skvamoznim hiperkeratotskim oblikom Mikosa zaustavljaju vagu za struganje sa površine plantara. Uz obrazac za pražnjenje mikoose, gumama mjehurića su režene za studiju.

Oprema za pripremu materijala za mikroskopsku istraživanje kose . Mali pad od 30% konte i predviđene kose nalazi se na površinskoj staklu staklene i igle za usisavanje. Pad kose malo se zagrijava preko plamena alkohola dok se parom ne pojavi iznad površine tečnosti ili gubitka oboda kristala duž ruba kapke alkalije. Nakon prekrivanja natkrivenog stakla, višak alkalija uklanja se filternim papirom. Lijek se ispituje prvo pod malim, a zatim pod velikim (X 400) povećanjem mikroskopa.

Vaga kože i noktiju . Tanki pahuljići za nokte za mikroskopske studije postavljaju se na slajd u kapljici od 30% CON-a i zagrijane dodavanjem alkalije tokom isparavanja. Hlađeni neoštećeni lijek prekriven je staklom premaza i mikroskopijom.

Gusta koža i pahuljići za nokte postavljeni su u cijevi centrifuge i izlijevaju se s nekoliko kapi od 30% con. Tube se zagrijava da kuha i ode 20-30 minuta. Komad omekšanog materijala sa staklenim štapom prenosi se na tobogan, pritisnuo utakmicu prije pojave "oblaka", nakon čega je mikroskopija.

Pus . Pad gljive pomiješa se s padom alkohola na pola s glicerinom i istražuje se u izvornom pripremu.

Kulturna dijagnoza

Kulturna dijagnostika se vrši za konačno pojašnjenje dijagnoze i pojašnjenja epidemiologije. Uključuje proizvodnju kulture gljiva sa naknadnim mikroskopskim pregledom.

Zaverena kosa, vage (koža i nok), mjehuriće gume ili maca padaju na umjetni hranljivi sastojak. U izgledu divovskih kolonija na Petrionu posuđe možete napraviti ideju o putu patogena (mikrosporum, trihophyton, epidermophyton), njegov oblik (L. Canis ili Ferrugineum, T. Violaceum, virlukosum ili gipseum). Konačno usavršavanje roda i vrste gljivice moguće je samo na temelju mikroskopske studije dobijene kulture.

Laboratorijska dijagnostika površinske kandidijaza

Za laboratorijska istraživanja Potreban je svježi materijal na gljivama poput kvasca. Za mikroskopsko istraživanje, ovisno o tome kliničke manifestacije i lokalizacija lezija, vage kože mogu se uzeti, ostavi sa noktima, pad gnoj ispod valjka za nokte, bjelkaste racije od pogođenih područja sluznice, zidova vagine, zidova vagine, Struganje iz sluznice uretre, kao i otrovi sa crvenim graničnim usanjem, pogođenim područjima od kože velikih i malih nabora.

Ovisno o mjestu poraza i prirode kliničkih manifestacija, materijal za studiju uzima pamučni obloge, skalpel, petlja itd. Kože i pahuljice za nokte, komadići epiderme i padina sluznice su prethodno liječeni sa 30% con. Patološki materijal se istražuje u neobojanim ili obojenim drogama.

U prvom slučaju materijal se miješa sa jednakom količinom alkohola sa glicerinom. Kada se slika u pogledu grama, ćelija kvasca i pseudomytelines izgleda tamno ljubičasto, uz cylu-nielsen - plavu, a na Romanovskom-Gymn - ružičasto-ljubičastom. Istovremeno, karakteristična karakteristika kvasce će se šaliti - otkriće oblika "sata". Uzimanje materijala iz sluznice usmene šupljine, genitalnih organa, od kože crvene granice usna, iz uglova usta, iz kože velikih i malih nabora vrši se sa sterilnim tamponom. Tampon nakon uzimanja materijala postavlja se u drugu sterilnu cijev sa tečnim gnojem. Ispitna cijev sa tamponom šalje se u mikrobiološku laboratoriju. Izdanje čiste kulture gljiva nalik na kvascu roda Candida izvedena je prema općenito prihvaćenoj mikrobiološkoj tehnici.

Mikroskopija -ovo je jedna od glavnih metoda u laboratorijskoj dijagnozi mikoza. Potrebno je provoditi ovu studiju od dana kada se prve kolonije pojave na hranjivim sastojcima. Prije mikroskopskog pregleda potrebno je znati gljivu sa kvascem ili plijesni - u izgledu kolonija, rezultata uzorka sjemena.

U mikroskopiji kalupa, strukturu micela (tj. Značajke GIF strukture, njihove boje, septicije; karakteristike strukture konidije i spora, uključujući veličinu, oblik, oblika njihovog stanice, septiknost , itd.)

Za mikroskopiju pripremite se porijeklom i oslikanpripreme. Za kuhanje oslikan Materijal za pripremu tretira se na različite načine:

1. BojaPas.Režim.Upotreba PAS metode omogućava vam identifikaciju neutralnih polisaharida u zidovima mikroorganizama. Neutralni polisaharidi su glucanski kompleks, koji se nalazi u ćelijskom zidu većine eumenata, zbog njega i bojenja.

Pas.-U - Jedna od metoda mikroskopske dijagnoze oblika tkiva gljivične infekcije. U praktičnim laboratorijama, različite izmjene ove metode koriste se za mikroskopsku dijagnostiku: kromiranje oksidacija - Bauer reakcija; Bojanje u Gridliju.

2. Bojanje prema gramunoj metodi (modifikacija gram-raegera) za identifikaciju pratećih mikroorganizama.

3. Boja u Tsil-Nilson za identifikaciju mikroorganizama otpornog na kiselinu. Ako materijal iz studiranja tečnostOd njega pripremaju nemućanu brisanje za mikroskopiju u prosvetnom tekućinu: mešavina alkohola sa glicerinom u omjeru 1: 1.

Sljedeća faza je micetološka studija.- Raspodjela i identifikacija gljiva. Razmotrite značajke ove faze ovisno o materijalu u studiji.

Mikrološka istraživanja

Kulturna istraživanja.Kulturno istraživanje temelji se na izboru patogena iz materijala u studiju. Rokovi za kultivaciju različiti su za različite vrste gljiva (od 2-4 dana do 4 tjedna), sa sumnjivim dimorfnim gljivama, kultura se razlikuje do 8 tjedana. Glavni mediji za uzgoj u mikrološkom laboratoriju su saburo okruženje: Dekstrozni agar Saburo (gust medij), saburo bujo (tečni medij). Za suzbijanje rasta bakterijske flore, antibiotika (kloramški, gentamicin, manje često streptomicin, penicilin), penicilin) \u200b\u200bdodaju se u Saburo medij. Za suzbijanje rasta gljiva saplofita, cikloheksimid, hloramfenikol, dodaje se u medij. Postoje gotovi mediji sa cikloheksimidom ( Mycobiotic. Mikozel).

Optimalni režim obrade za većinu patogenih gljivica je 30 0 C, 20-25 0 S, manje često 37 0 S - sa sumnjivim dimorfnim gljivama. Trajanje inkubacije za većinu gljiva je do 6 tjedana; Ako nakon toga nije primijećeno vrijeme rasta, onda dajte negativan odgovor. U slučaju sumnje u dimorfna mikroza u nedostatku rasta za 6 tjedana, kultura je sadrže 8 tjedana i tek nakon toga daju negativan rezultat.

Sa kulturom dijagnostički značajansu:

Izbor plijesni ili gljive kvasca, prilikom proučavanja sterilnog u normi materijala;

Izolacija dimorfne gljive.

Algoritam mirborskog istraživanja

1. Definiranje gljivične etiologije patogena (mikroskopija).

2. Odredite gljivu kvasca ili kalup:

Mikroskopija kliničkog materijala (prisustvo micela);

Priroda kolonija na hranjivim medijama, stopa rasta (gljive kvasca uzgajaju 48 sati, gljive kalupa polako rastu).

3. Završna identifikacija gljive na nivo (intraspecific) vrši se koristeći biohemijski testovi i imunološke metode. U studiju biohemijskih svojstava, proučava se sposobnost odabrane kulture do asimilacije (auxanogram) i fermentacije (Zigogram). Moguće je koristiti automatizirani identifikacijski sustavi (testni sustavi za identifikaciju gljiva).

Kriteriji etiološkog značaja raspodjele uslovno patogenih gljivica

1. U izvornom pripremu vidljivo je samo blastospoda (saprofistička vegetacija) (saprofisticistička vegetacija), a zatim se smatra kočijem.

3. Ako su blastospores sami i prevladavaju pseudomiteline, onda je ovo znak dubokih organskih lezija.

4. Aktivno osvajanje Blastpore - dokaz o akutnom procesu.

5. Pridružena procjena rezultata - raspodjela gljiva iz uzgoja

10 -Kaktivi, urin;

10 - Sputum.

6.Ovodnost uzorka jednog i jednog

7. Prisutnost antitijela na namjensku naprezanje.

Mikrološka studija odvojene sluznice

1. Priprema materijala.Nakon ograde materijala iz sluznice smješten je u 2 ml tečnog medija saburo ili wort-agar, ili mpb, prosipao u sterilne ispitne epruvete. Oni se temeljito uzdrmaju 5 minuta, pokušavajući da ne gušu plutu. Od dobijene suspenzije pripremite niz razrjeda 1:10 i 1: 100 itd.

Iz svakog razrjeđivanja, 0,1 ml na 2 šalice Suslo-agara, Agara Saburo ili MPa. Sjetva na gustim medijima i cijevi sa tekućim medijima sa tamponom za obogaćivanje inkubiraju se na +37 0 s 48 sati:

Nakon prošlosti, usjevi se gledaju i izračunavaju broj kolonija i približno određuju broj kolonija kvasca. Njihov se broj pomnoženo sa 20 i za uzgoj iz kojeg se izrađuje;

Ako nema rasta šalicama rasta, tada se ponavlja sjetva od srednjeg obogaćivanja do šalice sa Wort agarom.

Micheološko ispitivanje krvi

1. Priprema materijala.Nakon krvne ograde, uzgaja se 1:10, tako da baktericidna svojstva krvi ne inhibiraju rast gljiva.

2. Kulturno istraživanje.

Krv od 5-10ml zasijane u 50-100 ml saburo tekućeg medija sa 2% glukoze. Na temperaturi od 37 0 s, oni se inkubiraju tokom sedmice;

Nakon 5 dana čine kontrolnu sjetvu. Za to ste sterilni pipet popije 3-4 kapi iz pipete sa uzimljenju na Wort-agaru i trljaju sterilne bakteriološke petlje;

Setene čaše za 2-5 dana čuvaju se u termostatu na 37 0 s;

Ako se otkrije rast, onda dajte preliminarni odgovor o Funghemiji, a daljnja identifikacija gljivice se vrši tokom studije.

Mikrološka istraživanja bioptatsa

1. Za ogradu materijala koristite metodu ispisa.

2. Kulturno istraživanje:

Napravite otisak testnim komadom tkanine na površini gustih hranjivih sabura;

Isti komad tkanine postavljen je u 50 ml tečnog hranjivog medija (Wort ili Saburo);

Sevke se inkubiraju na 37 0 ° C 5 dana.